ساخت وکتور حاوی فیوژن ژن vp1 ویروس بیماری تب برفکی و ژن hsp70 و بررسی بیان پروتئین آن
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - دانشکده کشاورزی
- نویسنده سلماز یزدان پناه
- استاد راهنما فرحناز معتمدی سده حوریه سلیمانجاهی غلامرضا بخشی خانیکی
- سال انتشار 1391
چکیده
dna واکسن یک روش جدید ایجاد آنتی بادی ویژه – آنتی ژن و ایمنی بواسطه – سلول است. طرح اساسی dna واکسن یک ژن هدف- کاملا ساده کلون شده درون یک وکتور بیانی است. اتصال آنتی ژنها به hsp70 روش بالقوه ای برای افزایش تاثیر واکسن های dna می باشد. مکانیسم مولکولی آغازگر پاسخ های بالقوه ایمنی توسط hspها مبتنی بر این واقعیت است کهhspها ادجوانتهای طبیعی هستند و میتوانند سلولهای پردازشگر آنتی ژن را فعال کنند. در این تحقیق نیز علاوه بر ژن hsp70 در ساخت واکسن، از ژن vp1 به دلایل ذکر شده استفاده گردید. ژن vp1 بدین دلایل استفاده گردید که از 5 مکان آنتی ژنی شناخته شده نوع-o ویروس بیماری تب برفکی، 3 تا در vp1 جای دارند. بویژه، یک مکان آنتی ژنی g-h-loop درvp1 و حدود 213-200 باقیمانده ی –c ترمینال را شامل می شود. اسیدهای آمینه در لوپ در بردارنده اپی توپ های سلولی b و t هستند که می توانند پاسخ های ایمنی را تحریک کنند در هر دو مناطق در vp1 یک نقش اصلی را در تعیین نمودن آنتی ژنیستیه و ایمونوژ نیستیه ویروسی ایفاء می کنند. هدف این پروژه، ساخت وکتور فیوژن حاوی ژن hsp70 وvpویروس بیماری تب برفکی type o و بررسی بیان پروتئین آن می باشد، جهت این امر در روش کار پروژه تحقیقاتی مذکور، ژنvp1 (عامل بیماری_زا) به عنوان قسمت ابتدای ژن فیوژن (بعد از کدون شروع) و ژن hsp70 در قسمت دوم ژن فیوژن (بعد از آن کدون خاتمه) جهت ساخت dna واکسن بکار گرفته شدند. ژن vp1 از وکتور ptz57r/t هضم و جداسازی شد و در بالادست ژنhsp70 در وکتور pcdna3/1+ کلون گردید، سپس از طریق هضم آنزیمی، pcr و نیز تعیین توالی تأئید گردید. ناقل pcdna3/1+ حاوی ژن های فیوژن vp1-hsp70 با پرایمر t7 promotor تعیین توالی گردید(تعیین توالی توسط شرکت seqlab آلمان صورت گرفت). بیان پروتئینی آن نیز پس از ترنسفکت نمودن به رده سلولی پایدار کلیه نوزاد همستر، از طریق sds-page و وسترن بلات اثبات شد. نتیجه نهایی این پژوهش ساخت وکتور حاوی فیوژن دو ژن vp1 و hsp70 به عنوان یک نوع dna واکسن می باشد که می توان در پژوهش بعدی، جهت ساخت مرحله آخر واکسن سازی یعنی آزمایش در مدل حیوانی مورد استفاده قرار داد.
منابع مشابه
طراحی، ساخت و بیان اپی‌توپ‌های پروتئین VP1 ویروس تب برفکی سروتیپO ایران
Foot-and-mouth disease (FMD) is an extremely infectious and occasionally fatal viral disease with a rapid onset and a short course that affects cloven-hoofed animals and results in considerable financial losses. For this reason, availability of more reliable and efficient vaccines against Foot-and-mouth disease virus (FMDV) is felt as a necessity. The purpose of this study is to develop a ...
متن کاملطراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...
متن کاملشناسایی دگرگونی ژنتیکی در ویروس تب برفکی تیپ A با استفاده از تعیین ردیف نوکلئوتیدی قسمتی از ژن VP1 ویروس
,1s1ya:.J'$n :7tb !9y.tu;1 9; q 5t'1& p I r lt 4!lr 9 61,; .l.iy c.!! ob lr+ : tt 4jr.'j .Al JLrob.;qrolr,J'fll t q ..rlaLr. 4 RT-PCR ri,Sle 1r o.ri 6bi!l Jt-t5 RIA :.pe, .pe1 *q&,.5b.'.;9; VPr Oijl ,r,iiqo-f .ddisl-t,r-a.ttJ nlceloltl Jlhr""gbyp,glrrsc*l . d,ri$ multiplexRT-PCR cycle sequencing cie) jlosu:pl t r PCR Jr-e .ri . 'r-JJl9; a{.Jt Fluorescent dye deoxy-terminator ar.bgy.5bai...
متن کاملطراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
زمینه و هدف: هاری (rabies) یک آنسفالیت حاد است که سالانه سبب مرگ بیش از 60.000 انسان در جهان می شود. تنها راه نجات بیماران استفاده ی به موقع از واکسن های کارآمد است. هدف از این مطالعه معرفی یک سیستم بیانی یوکاریوتی جدید به منظور بیان ژن نوکلئوپروتیین (n) ویروس هاری می باشد. این سیستم جهت ارزیابی و ساخت واکسن ضد هاری به کار می رود. روش بررسی: توالی کامل ژن n سویه pv ویروس هاری به روش reverse tra...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - دانشکده کشاورزی
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023